ATP和乙酰胆碱诱发豚鼠耳蜗外毛细胞内CICR的激光共聚焦研究

摘要：

目的:运用激光共聚焦研究ATP和乙酰胆碱(ACh)对豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响以及诱发Ca2+介导的Ca2+释放(CICR)的可能机制.方法:用酶孵育机械分离法,分离豚鼠耳蜗外毛细胞(OHC),钙敏荧光探针Fluo-3染色后,用激光扫描共聚焦显微镜分别记录在细胞外液有钙或无钙条件下,加入ATP、ACh、斯里兰卡肉桂碱(Ryanodine)+ATP(或ACh)和毒胡萝卜素(Thapsigargin)+ATP(或ACh)后的OHC的[Ca2+]i的变化.结果:在含钙的细胞外液中,ATP、Ryanodine+ATP、Thapsigargin+ATP、ACh、Ryanodine+ACh和Thapsigargin+ACh均可引起[Ca2+]i升高,引起明显的波峰,荧光强度相对峰值分别为1.60±0.01(ATP)、1.644±0.005(Ryanodine+ATP)、1.491±0.005(Thapsigargin+ATP)、1.43±0.01(ACh)、1.58±0.02 (Ryanodine+ACh)、1.398±0.003(Thapsigargin+ACh);而在不含钙的细胞外液中,ATP和Ryanodine+ATP仍可引起[Ca2+]i出现幅度较小的波峰,分别为1.341±0.006和1.386±0.008,而ACh、Ryanodine+ACh、Thapsigargin+ACh和Thapsigargin+ATP未引起明显[Ca2+]i波峰出现,其中ACh不能引起[Ca2+]i的升高,Ryanodine+ACh、Thapsigargin+ACh和Thapsigargin+ATP分别引起[Ca2+]i缓慢升高.结论:在细胞外液有Ca2+的条件下,ATP和ACh引起OHC的[Ca2+]i升高,除了通过离子通道引起胞外Ca2+内流,还有IP3敏感钙库的释放和诱发CICR.在无Ca2+的条件下,ATP仍能诱发CICR,其机制可能是ATP促进IP3敏感钙库释放Ca2+,Ca2+又诱发了CICR,而ACh的反应是Ca2+依赖性的,在细胞外液无Ca2+的条件下,ACh不能引起IP3敏感钙库的释放和诱发CICR.

关键词：三磷酸腺苷、乙酰胆碱、Ca2+介导的Ca2+释放、外毛细胞、钙、耳蜗

所属期刊栏目：23

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目 30772396

在线出版日期：2009-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：316-321