阴沟肠杆菌B8拮抗活性相关基因的克隆与分析

摘要：

为研究具有广谱拮抗活性的阴沟肠杆菌B8的拮抗机理,应用自杀性质粒pZJ25,将Tn5转座到B8的染色体上,筛选到2株拮抗活性丧失的菌株.选择其中B8F突变株,应用Tn5上的Kanr基因作为标签,对Tn5插入位点右侧的拮抗活性相关基因片段进行了克隆,筛选得到质粒pTLF,经亚克隆后测序,获得F片段735 bp的序列.提取原始菌株B8基因组DNA,酶切后与Pst Ⅰ接头连接,应用接头引物和根据F片段设计的特异引物,在F片段的左右两侧进行染色体步行,获得了F片段(Tn5插入位点)左侧的1106 bp序列和F片段右侧的664 bp序列.生物信息学分析显示,获得的B8菌株拮抗相关基因序列包含3个ORF,与Pantoea agglomerans的andrimid生物合成基因簇(基因GenBank登录号AY192157)有较高的同源性,分别对应于admM,admN和admO共3个基因.被Tn5插入破坏的ORF(命名为anrF基因)对应于admM(Polyketide合酶基因),插入位点位于终止密码前214 bp处.由此证明,anrF基因与B8菌株的拮抗活性相关,推测B8菌株产生的拮抗物质为andrimid.

关键词：阴沟肠杆菌B8、拮抗机理、anrF基因、andrimid生物合成基因簇

所属期刊栏目：49

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金39870034;国家高技术研究发展计划863计划104-04-01-01;浙江省招标项目021102529

在线出版日期：2004-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1139-1144