豌豆肌动蛋白异型体(PEAc1)与绿色荧光蛋白融合基因的原核表达与特性分析

摘要：

肌动蛋白普遍存在于真核生物细胞中,并在细胞生命活动中发挥重要作用.在细胞中,肌动蛋白多以异型体(isoform)形式存在.植物肌动蛋白异型体的大量获得和理化特性分析一直是一个难题.对豌豆肌动蛋白异型体PEAc1与组氨酸标签(His-tag)、绿色荧光蛋白(GFP)进行了基因融合和原核表达.通过脲变性、梯度脲透析复性、镍柱亲和层析的方法从包涵体中纯化出大量、高纯度的PEAc1-GFP融合蛋白(>2mg/L培养物).理化特性分析表明,它同鸡骨骼肌肌动蛋白一样,单体PEAc1-GFP能与DnaseⅠ结合并显著抑制后者酶活性;单体PEAc1-GFP能聚合成带有绿色荧光的丝状结构;聚合的PEAc1-GFP能被微丝的特异标记物鬼笔环肽(phalloidin)标记;PEAc1-GFP与鸡骨骼肌肌动蛋白的聚合曲线趋势基本一致,聚合临界浓度为0.24μmol/L;聚合的PEAc1-GFP能激活肌球蛋白Mg-ATPase活性,其激活比率随浓度的增加而增加,在1mg/mL浓度下,能激活4倍以上.上述结果表明,带有组氨酸标签和GFP标记的PEAc1表现出和天然肌动蛋白相似的理化特性;基因融合、原核表达、变性、复性及亲和纯化是获得大量高纯度植物肌动蛋白异型体的有效方法.

关键词：肌动蛋白、异型体、原核表达、纯化、理化性质

所属期刊栏目：49

分类号：Q94(植物学)

资助基金：国家自然科学基金30170457,39970358,30270664,39600073

在线出版日期：2004-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：563-569