参与唇腭部发育的重要蛋白复合体ESCRTⅢ的单分子检测体系的构建

摘要：

目的 构建参与唇腭部发育的重要蛋白ESCRTⅢ的单分子检测体系.方法 分析ESCRTⅢ蛋白的结构,选取不影响结构稳定和纤丝形成的氨基酸进行突变,体外提取突变蛋白检测蛋白的稳定性,吸收光谱检测突变蛋白荧光标记的效率,负染电镜观察突变蛋白形成纤丝的能力,负染电镜观察和离心沉淀分析突变体蛋白形成的纤丝被Vps4解聚的能力.结果 选取了ESCRTⅢ蛋白Snf7上的5个位点,K57,G58,N59,G120和D122,分别突变为半胱氨酸,其中K57C突变体蛋白不稳定聚沉,G58C突变体蛋白荧光标记效率低,N59C和G120C突变体蛋白影响纤丝形成,只有D122C突变体蛋白稳定,标记效率高,且标记后的蛋白能正常形成纤丝并被Vps4蛋白解聚.结论 筛选出了Snf7 D122C突变体适用于利用单分子技术检测ESCRTⅢ纤丝的解聚动态过程,从而为进一步在细胞水平和体内研究ESCRT系统对腭部发育的作用提供支持.

关键词：唇腭裂、Snf7、ESCRTⅢ、单分子检测、Vps4

所属期刊栏目：26

资助基金：国家自然科学基金31670746National Natural Science Foundation of China 31670746

在线出版日期：2019-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：152-156