CDC20通过泛素蛋白酶体途径降解p65调控人脂肪间充质干细胞成骨向分化

摘要：

目的:探究细胞分裂周期蛋白20(cell division cycle 20,CDC20)对人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs)成骨分化的调控作用及其机制.方法:将hASCs分别进行成骨向诱导0、7、14 d后,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测CDC20表达量的变化.对稳定敲低CDC20的hASCs进行成骨向诱导后,分别通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色定量实验,Western blot检测成骨相关标志物的表达.将稳定敲低CDC20的hASCs与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)材料混合植入裸鼠皮下,8周后取材,HE、MASSON染色检测骨胶原的形成.对过表达CDC20的hASCs进行成骨向诱导后,通过ALP染色定量实验检测hASCs成骨向分化.利用免疫共沉淀和Western blot探索CDC20和p65的关系.构建CDC20和p65双敲细胞系,检测p65在CDC20调控骨再生中的作用.结果:在hASCs成骨向分化过程中,CDC20的表达显著升高(P<0.05).稳定敲低CDC20的hASCs在成骨诱导后ALP活性为(7.31±0.25)、(11.01±0.49)U/gprot,低于对照组(16.00±0.35)U/gprot,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示敲低CDC20组RUNX2的蛋白水平降低.稳定敲低CDC20的hASCs与β-TCP材料混合物植入裸鼠皮下8周后其形成的骨胶原较对照组减少.过表达CDC20的hASCs在成骨诱导后ALP活性为(20.74±0.53)U/gprot,高于对照组(12.58±0.42)U/gprot,差异有统计学意义(P<0.05).CDC20可结合p65;敲低CDC20后,p65的表达量升高;过表达CDC20后,p65的表达量降低,且在加入蛋白酶体抑制剂MG132后回升.CDC20和p65双敲细胞系成骨诱导后,ALP染色及定量结果表明CDC20对hASCs成骨向分化的调控依赖于p65.结论:CDC20通过泛素蛋白酶体途径降解p65促进人脂肪间充质干细胞成骨向分化,为骨再生提供全新的潜在治疗靶点.

关键词：人脂肪间充质干细胞、细胞分裂周期蛋白20、成骨向分化、p65

所属期刊栏目：38

分类号：R734.2;R394.2;R965

资助基金：国家自然科学基金;北京市自然科学基金;北京市自然科学基金

在线出版日期：2022-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：565-571