FimH重组蛋白的原核表达及纯化

摘要：

目的:在大肠杆菌中构建并表达3种FimH重组蛋白,并对FimH重组蛋白的培养条件进行优化,制备高纯度FimH重组蛋白.方法:采用原核表达载体pET28a构建出能表达FimH的重组质粒,并分别对诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等条件进行优化,以提高重组蛋白的产量和增大其可溶性,最后以亲和层析分离纯化3种FimH重组蛋白.结果:成功构建出表达大肠杆菌(K12,BL21)和沙门氏菌(S.T.)FimH的原核表达载体pET28a-K12/BL21/S.T.,经酶切、测序和Western Blot鉴定,目的蛋白表达正确.在适当浓度的IPTG诱导,15℃震荡培养20 h,可使FimH的表达量达到最大,分离纯化的蛋白在SDS-PAGE中显示为一条带.结论:本研究构建以3种FimH为表面呈现系统的表达载体,3种FimH基因和预测蛋白结构略有差异.本研究为后续研究3种蛋白 生物活性差异及其靶向M细胞的免疫佐剂活性提供物质基础.

关键词：FimH、大肠杆菌、沙门氏菌、重组蛋白、表达和纯化

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分类号：R781.2(口腔科学)

资助基金：国家自然基金面上项目资助编号:81070822大学生科学研究项目S2013700

在线出版日期：2013-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：893-896