NRP—1在调控人舌鳞状细胞癌细胞分化中的作用
目的:构建神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP-1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对人舌鳞状细胞癌细胞株SCC25(squamous cell carcinoma 25)分化的影响.方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰NRP-1编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1.将构建正确的PL-KO.1/NRP-1-shRNA感染SCC25,western blot和实时荧光定量PCR检测NRP-1的表达,划痕实验和实时荧光定量PCR检测其对SCC25分化的影响.结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,SCC25转染了NRP-1-shRNA后NRP-1表达水平降低,干扰效率达65％.划痕实验结果表明NRP-1下调明显降低了SCC25的迁移能力.实时荧光定量PCR结果表明NRP-1下调可以导致SCC25上皮标记蛋白钙粘附蛋白(epithelial cadberin,E-cadherin)表达上调,而间充质标记蛋白纤粘蛋白(fibronectin.FN)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达下调,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05).结论:慢病毒介导的NRP-1-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响SCC25的分化.
短发夹RNA、慢病毒载体、神经纤毛素1、SCC25
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R739.86(肿瘤学)
江苏省自然科学基金BK2010531
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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