链球菌gordonii FSS2 N-乙酰氨基葡糖苷酶基因的克隆和表达

摘要：

目的:N-乙酰氨基葡糖苷酶(N-acetylglucosaminidase)是链球菌gordonii六种胞外糖苷酶之一.为研究该酶,克隆和表达该基因片段.方法:将链球菌gordonii FSS2染色体DNA分离提纯,用限制性内切酶Sau 3AI不完全酶切,产生长度不等的随机片段,琼脂糖凝胶电泳分离和回收2-8 kpb的随机片段,然后与BamHI线性化及5' 端脱磷处理的载体pUC 18连接,转化大肠杆菌XL1-Blue;β-半乳糖苷酶筛选系统及酶切,检测插入片段.根据N-乙酰氨基葡糖苷酶与特异人工底物X-GlucNac反应,有色物质X被释放原理,筛选表达克隆.结果:共有6×106个转化子,约50%转化子含有插入片段;检测到8个N-乙酰氨基葡糖苷酶表达克隆.结论:所构建的基因组文库具有完整性,该基因在大肠杆菌XL1-Blue中成功表达.

关键词：链球菌gordonii FSS2 N-乙酰氨基葡糖苷酶、基因文库

所属期刊栏目：18

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：313-315