LincRNA-EPS对脂多糖诱导的小鼠牙周膜细胞炎症因子表达的影响

摘要：

目的:探究基因间区长链非编码RNA-EPS(long intergenic noncoding RNA,lincRNA-EPS)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的小鼠牙周膜细胞(mouse periodontal ligament cells,mPDLCs)炎症因子表达的影响.方法:使用CRISPR/Cas9技术构建lincRNA-EPS基因敲除的C57BL/6J小鼠.分离培养野生型及lincRNA-EPS基因敲除型mPDLCs,并进行免疫荧光鉴定.制备纳米粒材料,搭载lincRNA-EPS过表达质粒,并测定转染效率.设立5个实验组:野生型对照组(WT组)、野生型刺激组(WT+LPS组)、敲除型对照组(KO组)、敲除型刺激组(KO+LPS组)和挽救实验组(KO+LPS+lincRNA-EPS组).在WT+LPS组、KO+LPS组及KO+LPS+lincRNA-EPS组中添加100 ng/mL的LPS,刺激6 h,其中,在KO+LPS+lincRNA-EPS组中提前加入lincRNA-EPS过表达质粒进行转染.WT组及KO组不做处理.利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各实验组炎症因子cxcl10、cxcl12、cxcl14、IL-1α、IL-6 mRNA的表达量.应用酶联免疫吸附测定技术(enzyme-linked im-munosorbent assay,ELISA)测定各组炎症因子cxcl10、IL-1α、IL-6的蛋白水平.结果:成功构建了lincRNA-EPS基因敲除的C57BL/6J小鼠模型;搭载lincRNA-EPS过表达质粒的纳米粒成功转染了mPDLCs,转染效率接近20％;在无LPS刺激的状态下,KO组的炎症因子表达水平较低,且与WT组无差异(P>0.05),lincRNA-EPS基因的缺失不会导致mPDLCs炎症因子基础表达量的改变;LPS刺激6 h后,KO+LPS组和WT+LPS组相较于各自的对照组,各个炎症因子的表达均上调(P<0.05),且KO+LPS组相较于WT+LPS组,各炎症因子表达上调更为显著(P<0.05),说明lincRNA-EPS缺失的mPDLCs受到LPS刺激时,更易引发强烈的炎症因子表达;KO+LPS+lincRNA-EPS组相较于KO+LPS组,炎症因子的表达量下调(P<0.05),可见外源性lincRNA-EPS的转入在一定程度上抑制了炎症因子的表达.结论:lincRNA-EPS对LPS诱导的mPDLCs炎症因子表达起负向调控作用.

关键词：基因间区长链非编码RNA、脂多糖、牙周炎、小鼠牙周膜细胞

所属期刊栏目：31

分类号：R782(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金项目81873715、81572114

在线出版日期：2021-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1-8