VEGF基因体外转染肌卫星细胞的研究

摘要：

目的:寻找一种改良组织工程种子细胞的新方法,检测人血管内皮生长因子-165(VEGF165)基因转染肌卫星细胞(muscle satellite cell,MSC)的效果及目的基因的表达情况.方法:取SD大鼠的胎鼠后肢及背部肌肉,差速贴壁法接种培养MSC,观察细胞生长特性.取第2代细胞,按3:1比例用Lipofectamin 2000转染试剂介导,将重组真核表达质粒pEGFP-C1-VEGFl65 (pEGFP为增强绿色荧光蛋白)转染MSC,转染后24～72 h和传代后分别用倒置荧光显微镜观察标志基因增强绿色荧光蛋白的表达情况,计算转染效率.转染细胞爬片行VEGF165免疫组织化学染色检测VEGF165的表达.提取转染后48 h的细胞总RNA,RT-PCR检测VEGF165基因的表达.结果:MSC在接种后24 h开始贴壁,伸展成长梭形,原代细胞呈集簇状分布.在转染后24 h即有细胞表达绿色荧光蛋白,荧光强度和表达细胞总数在72 h时达高峰,传代后仍可观察到pEGFP的表达,转染后部分细胞形态发生变化.VEGF165免疫组织化学染色证实在胞质中有大量棕黄色颗粒,RT-PCR证实有与VEGF165 cDNA大小相符条带出现,荧光检测转染效率约22%.结论:使用Lipofectamin 2000转染试剂可有效地转染体外培养的MSC.VEGF165基因转染的MSC可表达基因产物,有望作为组织工程骨研究中的基因工程化种子细胞.

关键词：血管内皮生长因子、肌卫星细胞、脂质体、转染

所属期刊栏目：19

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：上海市浦江人才计划项目05PJ14097

在线出版日期：2009-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：323-328