shRNA-Bmi1重组载体构建及其对胆囊癌裸鼠移植瘤hTERT表达的影响

摘要：

目的 体外构建及鉴定shRNA-Bmi1重组载体,探讨靶向沉默原癌基因Bmi1对人胆囊癌细胞Bmi1mRNA表达、蛋白表达及对裸鼠皮下移植瘤hTERT表达的影响.方法 针对Bmi1不同位点构建4个shRNABmi1重组质粒,采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和Western blot检测各组Bmi1mRNA和蛋白表达,选择有效干扰组进行体内实验.构建GBC-SD裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为shRNA-Bmi-4组(实验组)、shRNA-Scramble(错配组),Lipofectamine(阴性对照组),GBC-SD(空白对照组).成瘤后进行移植瘤治疗,治疗6周后处死裸鼠,免疫组化检测裸鼠移植瘤hTERT蛋白表达水平.结果 成功构建了shRNA-Bmi1重组载体.转染胆囊癌48 h后倒置荧光显微镜观察发现shRNA-Bmi1-4组GBC-SD绿色荧光强度增强、转染效率最高,RT-PCR及Western blot结果显示shRNA-Bmi1-4组mRNA及蛋白表达量均明显低于各对照组(P＜0.05),对照组间表达量差异无统计学意义(P＞0.05).选取shRNA-Bmi1-4组作为有效干扰序列作后续体内实验.免疫组化检测shRNA-Bmi-4组裸鼠移植瘤hTERT蛋白表达水平明显低于各对照组(P＜0.05),对照组间蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外成功构建了shRNA-Bmi1重组载体,顺利进行重组载体的转化和转染实验.靶向沉默Bmi1基因可有效促进胆囊癌细胞Bmi1mRNA降解、抑制其蛋白的表达,同时有效抑制GBC-SD裸鼠移植瘤hTERT蛋白表达.

关键词：shRNA-Bmi1、重组载体、GBC-SD、皮下移植瘤、hTERT

所属期刊栏目：37

分类号：R735.8(肿瘤学)

资助基金：云南省应用基础研究计划项目2011FZ124

在线出版日期：2016-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：8-14