慢病毒载体介导CD1d和GFP融合基因转染PANC-1细胞的实验研究

摘要：

目的 构建人免疫基因CD1d与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因慢病毒载体并转染人胰腺癌细胞(PANC-1).方法 实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得CD1d的全外显子片段,使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中,慢病毒包装质粒和穿梭质粒转染293T细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定.通过慢病毒转染预实验确定MOI,进行人CD1d重组慢病毒载体转染胰腺癌PANC-1细胞株.结果 电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI收录的CD1d基因序列完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染PANC-1细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光.结论 成功构建了CD1d与GFP融合基因慢病毒表达载体并转染人胰腺癌细胞.

关键词：CD1d基因、GFP基因、慢病毒、转染

所属期刊栏目：34

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：云南省科技厅应用基础研究联合专项基金资助项目2010CD196

在线出版日期：2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：31-34