UbcH5B活性位点突变体对野生型E2传递泛素活性的影响

摘要：

蛋白质泛素化需要泛素活化酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3的依次作用,但泛素结合酶E2不仅在泛素传递中起中间者的作用,还可能决定泛素链的特异性以及调控泛素化过程.为了更加深入了解E2参与的泛素传递调控机制,通过将泛素结合酶UbcH5B催化活性位点Cys85突变成Ser,获得可以与Ub结合得到更加稳定复合物的突变体UbcH5B-C85S,探究突变体对野生型E2体外泛素传递的影响.首先构建野生型E2和UbcH5B-C85S的表达质粒,然后通过原核表达和使用Ni-NTA亲和柱层析纯化,获得有活性的人重组E2蛋白;设置体外泛素转移反应,通过Western blot等方法,分别在E2和E3水平分析UbcH5B-C85S对野生型E2泛素转移反应的作用.结果 显示:突变体UbcH5B-C85S可以部分抑制泛素从E1传递到UbcH5B和E2-25K,并且可以抑制UbcH5B将泛素传递到泛素连接酶TRIM23.这些结果有助于更深入了解泛素化的活性调控机制.

关键词：蛋白质;泛素;泛素化;泛素结合酶;UbcH5B;突变体

所属期刊栏目：46

分类号：Q55(酶)

资助基金：国家自然科学基金项目;上海市科委基础研究领域项目

在线出版日期：2021-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：103-112