厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达

摘要：

厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶，但由于对厌氧环境的生产条件要求严格，生长速度缓慢，并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a (+)连接，得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析，在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0，最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示：诱导培养18 h时，内切型-β-葡聚糖酶（CMC酶）活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。

关键词：生物化工、厌氧真菌、内切型-β-葡聚糖酶、重组大肠杆菌、基因表达

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863基金资助项目编号2007AA05Z401；国家科技支撑计划基金资助项目编号2007BAD66B02；绍兴文理学院重点科研项目编号2012LG1017。

在线出版日期：2014-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：44-48