高效液相色谱法检测细胞能量代谢物质的方法建立与应用

摘要：

建立高效液相色谱法(HPLC)测定细胞中ATP、ADP和AMP含量的方法,以比较高糖培养的MRC-5细胞和D-半乳糖诱导的拟衰老MRC-5细胞能量代谢水平.体外培养的细胞经高氯酸裂解后,用反向HPLC法检测两组细胞ATP、ADP和AMP的含量.HPLC系统采用Ecosil C18反相柱(4.6*250mm 5μm pH 2～8),流动相为15mM磷酸二氢钾缓冲液和10％甲醇,流速0.5mL/min,紫外检测波长为254nm;检测温度为25℃,进样量20μL.以标准曲线法计算ATP、ADP和AMP含量,并计算腺苷酸能荷(EC).结果显示拟衰老细胞的ATP含量及EC较对照组显著降低,而AMP含量明显升高,差异具有统计学意义(p＜0.05)；但两组之间的ADP含量没有明显差别.结果表明高效液相色谱法可检测出不同状态细胞能量物质的差异,其具有操作简便、快速、重现性好等特点,可以作为线粒体能量代谢功能的评估方法之一.

关键词：高效液相色谱法、ATP、ADP、AMP、细胞能量代谢

所属期刊栏目：28

分类号：R318.03(医用一般科学)

资助基金：浙江省教育厅科技项目Y200804470

在线出版日期：2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：46-50