重组FLAG标签的融合表达纯化及亲和常数的测定

摘要：

构建了三种融合标签FLAG1(DYKDDDDK)、FLAG2(DYKDYKYK)和FLAG3(DYKGGGYK)的原核表达质粒pGEX-2t-His-NSH2-FLAG,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,表达并纯化重组蛋白GST-His-NSH2-FLAG.生物信息学分析表明FLAG1的亲水性和抗原性较强,FLAG2次之,FLAG3最弱.Western blotting分析表明单抗M2能够识别此三种FLAG融合蛋白.非竞争性酶免疫法测得FLAG1、FLAG2和FLAG3结合单抗M2的亲和常数分别为0.077μM,0.102μM和0.126 μM.相关工作为在多肽芯片上应用FLAG标签进行蛋白质相互作用的检测奠定了一定的基础.

关键词：FLAG、融合标签、蛋白纯化、亲和常数

所属期刊栏目：26

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：浙江省生物医学工程重中之重学科人才基金

在线出版日期：2010-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：350-357