不同二价阳离子对T-载体生成的影响

摘要：

目的载体加dT尾是基于非模板扩增特性而发展起来的,是TA克隆技实际应用中加尾率不高,为此对不同二价阳离子对载体加dT尾的影响效果进行比较,以摸索高效加尾条件.方法用限制性内切酶SmaI将质粒pGEM7Zf(+)消化成平末端的线性片段,借助二价阳离子和Taq DNA聚合酶的作用在线性片段3'-末端上添加dTTP,随后与Control Insert DNA连接成环状DNA,再转化进E. coli DH5α-FT.根据白色菌落所占比例来评价不同种类和浓度的二价阳离子对T-载体生成的影响.结果不同种类和浓度的二价阳离子加尾效果比较显示,含1 mmol/L Cd2+缓冲体系的加尾效果最佳;Co2+及高浓度的Cd2+容易导致DNA反应体系变得浑浊,甚至出现白色沉淀析出的现象.结论Cd2+最有助于加尾,Mn2+次之,Mg2+最差.

关键词：T-栽体、Cd2+、正交试验

所属期刊栏目：22

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：教育部留学基金2003-406;Tianjin Natural Sci. Found043606711;南开大学校科研和教改项目ZB0001

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：169-172