热胁迫下八字地老虎hsc70基因在不同组织转录表达差异性分析
为探讨八字地老虎 Xestia c-nigrum（Linnaeus）Xe-hsc70基因表达与高温耐受性之间的关系，比较热胁迫下Xe-hsc70基因在不同组织中诱导表达的差异。本研究以八字地老虎4龄幼虫为研究对象，采用RT-PCR和RACE技术克隆获得编码热激同源蛋白70（70 ku heat shock cognate， HSC70）的基因（命名为Xe-hsc70）cDNA全序列与基因组DNA序列（Genomic DNA，gDNA），并利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术，比较分析不同热胁迫温度及不同热诱导时间下八字地老虎4龄幼虫体内马氏管、中肠、体壁、脂肪体与唾腺5个组织中Xe-hsc70基因在mRNA转录与蛋白表达两水平上相对表达量的变化。比较分析克隆得到的Xe-hsc70基因cDNA全序列和gDNA序列，结果表明Xe-hsc70基因含有8个内含子，最大内含子（561 bp）位于5′端非编码区，并含有一个类似热激应答原件HSE的核心结构序列（gaatatgCaGAAtgTTCcaGaa），其余内含子（长度在86~218 bp之间不等）均在编码区内，本研究首次报道了八字地老虎hsc70内含子的具体数目及位置。组织差异性分析显示：在常温25℃条件下，Xe-HSC70在脂肪体中表达量最高，在唾腺中表达量最低；经热激诱导后中肠、唾腺与体壁组织中Xe-HSC70的表达量与对照（25℃）相比显著上调，随着热激时间的延长，表达量呈现出先升高后恢复至对照水平的变化趋势，脂肪体和马氏管 Xe-HSC70表达量与对照相比无明显变化。八字地老虎不同组织在应对热胁迫的过程中，抗逆机制具有明显的差异。Xe-HSC70的不断积累是八字地老虎对热胁迫不断适应的一个过程，其组织中 Xe-hsc70基因的高表达在八字地老虎抗热胁迫的过程中起着重要作用，并为从分子水平上研究八字地老虎的抗逆机理提供依据。
八字地老虎、热激同源蛋白70、实时荧光定量PCR、Western blotting
S43;S47
现代农业产业技术体系建设专项CARS-04；公益性行业农业专项资助201103002
2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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