柞蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI基因克隆及表达特征分析

摘要：

克隆柞蚕（Antheraea pernyi）Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂（ApKTSPI）基因的cDNA序列并进行序列分析，研究 ApKTSPI 基因的组织表达分布及病原物免疫刺激后的表达模式，原核表达ApKTSPI。利用RACE-PCR方法扩增柞蚕ApKTSPI基因全长cDNA，生物信息学软件进行序列分析，利用实时定量PCR检测柞蚕ApKTSPI基因的组织分布及免疫刺激后的表达模式，利用pET-28a载体在大肠杆菌BL21中融合表达ApKTSPI。柞蚕ApKTSPI基因的cDNA全长568 bp，开放阅读框编码96个氨基酸，含一个Kazal结构域。ApKTSPI基因在柞蚕5龄幼虫脂肪体中特异性高表达，在核型多角体病毒、大肠杆菌和白僵菌免疫刺激后表达量都能上调，但上调的程度和时间都不同。ApKTSPI在大肠杆菌中成功诱导表达。获得了柞蚕ApKTSPI基因的cDNA全长，并研究了ApKTSPI基因的表达模式，为进一步研究其在柞蚕免疫中的功能及作用机理奠定了基础。

关键词：柞蚕、Kazal、基因克隆、表达特征

分类号：R28;R97

资助基金：国家自然科学基金项目31301715；安徽省自然科学基金项目1308085QC60；安徽农业大学引进和稳定人才项目YJ2013-8

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1003-1013