草地贪夜蛾PP2A的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

摘要：

为建立斑蝥素等PP2A抑制剂的体外活性测定方法,用于以杀虫剂为目的的药物快速活性评价,本研究首次同源克隆了鳞翅目昆虫草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda(J.E.Smith)的PP2A催化亚基cDNA全长序列,探索了该基因在大肠杆菌中的表达.结果显示,S.frugiperda的PP2A编码一条309个氨基酸的肽链,预测其蛋白质分子量为35.46 ku,等电点5.37.分析蛋白质氨基酸序列,没有发现信号肽和跨膜结构,推测该PP2A主要存在于胞质中.多重比对分析S.frugiperda及其它昆虫的PP2A,表明PP2A的保守性较高,可以用S.frugiperda PP2A作为研究斑蝥素等抑制剂的药物筛选靶标酶,用于杀虫剂的筛选.利用该基因构建pET30a-PP2A原核表达载体转化至E.coli BL21(DE3)中,在16 ～30℃,0.2 ～0.8 mmol/L的IPTG下均能成功诱导PP2A-His表达,经Ni-琼脂糖柱纯化后可以得到SDS-PAGE呈现单一条带的纯化蛋白,电泳纯度大于90％,为进一步活性测定奠定了基础.

关键词：草地贪夜蛾、蛋白磷酸酶2A、分子克隆、原核表达

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资助基金：国家自然科学基金项目30971938,31272099;北京市教委科技创新平台项目PXM2008_014207_055164;北京市高校人才强教计划项目PHR-201107135;国家科技支撑计划-果蔬重大病虫害防控技术研究与示范2012BAD19B06

在线出版日期：2013-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1328-1334