飞蝗羧酸酯酶基因LmCarE25的体外重组表达
羧酸酯酶(Carboxylesterase,CarE)是一类在生物中广泛分布的多功能家族酶系,在昆虫抗药性形成机制中发挥重要作用.为探讨飞蝗Locusta migratoria (Meyen)羧酸酯酶基因LmCarE25的生物学功能,本文采用荧光实时定量PCR技术进行研究,发现其在飞蝗成虫各组织部位均有表达,其中胃盲囊、翅和肌肉中表达量较低,中肠、马氏管和脂肪体表达量较高.本文尝试在大肠杆菌和昆虫细胞体外重组表达该酶,构建重组表达载体pET32a-LmCarE25,SDS-PAGE结果显示,LmCarE25可在大肠杆菌BL21(DE3)和JM109中表达,蛋白分子量约为60 ku,但为包涵体；将LmCarE25基因插入真核表达载体pFastBacHTA中,借助Bac-to-Bac(R)体系获得重组Bacmid,以sf9细胞系作为宿主细胞表达目的蛋白,Western-Blot检测结果显示,LmCarE25获得可溶性表达.上述结果为进一步深入研究飞蝗羧酸酯酶家族功能提供了基础资料.
飞蝗、羧酸酯酶、real-time PCR、原核表达、真核表达
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国家自然科学基金项目31101463;高等学校博士学科点专项科研基金20111401110006,20111401120009;公益性行业农业科研专项200903021;山西省自然科学基金2011011033-1;山西省青年科技基金2012021027-1
2013-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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