意大利蜜蜂丙糖磷酸异构酶基因的克隆及其原核表达与纯化
从意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica 的肌肉组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法克隆蜜蜂第16号染色体上的丙糖磷酸异构酶基因的cDNA序列,将测序结果(GenBank登录号EU76098)与推导的氨基酸序列分别与GenBank中的其他物种进行同源比对分析.结果表明,该基因全长744 bp,为完整的阅读框,编码247个氨基酸,成熟蛋白的理论分子量为26.89 kD.比对结果显示AmTPI与家蚕、德国小镰、黄粉虫、丽蝇蛹集金小蜂、水稻等物种的基因相似性达69%以上,蛋白相似性达59%以上.将目的基因克隆到pGEX-4T-2融合表达载体上,并在大肠杆菌中得到成功表达,4 h的表达量为总蛋白的42.1%.为了进一步探讨产物的酶学特性,实验还对表达产物进行纯化与浓缩.实验还构建增强型荧光真核表达质粒,为进一步研究AmTPI在真核细胞中的表达情况奠定基础.
丙糖磷酸异构酶、意大利蜜蜂、基因克隆、原核表达
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Q96(昆虫学)
国家自然科学基金30671589
2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
703-709
