烟夜蛾几丁质酶基因的克隆与表达

摘要：

运用RT-PCR技术扩增编码烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guen閑)幼虫几丁质酶基因的cDNA片段,将其克隆至pMD18-T载体,获得该基因的成熟蛋白阅读框序列.将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T-2中,并转化入原核细胞中表达,序列测定结果表明,烟夜蛾幼虫几丁质酶基因的成熟蛋白阅读框全长1 338 bp,编码445个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为50.1 kDa和9.26;推导的氨基酸序列与其近缘种棉铃虫几丁质酶氨基酸序列的一致性达99%,与其他6种昆虫几丁质酶的氨基酸序列也高度一致(65%～76%),并具有几丁质酶的典型特征.将该基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上并转化B121,SDS-PAGE和Western印迹分析表明,经IPTG诱导,76 kDa附近没有特异蛋白条带出现,表明烟夜蛾几丁质酶基因不能在原核表达载体pGEX-4T-2中表达.

关键词：烟夜蛾、几丁质酶、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：46

分类号：S43;S47

在线出版日期：2009-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：223-229