棉铃虫组织蛋白酶B多克隆抗体制备及鉴定

摘要：

介绍了用重组的棉铃虫组织蛋白酶B(HCB)制备兔多克隆抗体的方法.用已经克隆得到的pGEX 4T-1/HCB重组质粒转化的大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株进行诱导表达,获得融合表达的包涵体产物.经过变性、复性等方法处理包涵体,获得可溶性融合蛋白.用凝血酶裂解融合蛋白,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化目的蛋白HCB,用做抗原免疫家兔.产生的抗血清经硫酸铵沉淀,最后得到了抗棉铃虫组织蛋白酶B的多克隆抗体.用间接酶联免疫吸附测定法测得该抗体对重组表达的组织蛋白酶B和棉铃虫体内的组织蛋白酶B的效价分别为1∶51 200和1∶25 600.通过免疫印迹检测证明此抗体不仅可以识别重组表达的棉铃虫组织蛋白B,而且可以识别棉铃虫卵巢匀浆液中的棉铃虫组织蛋白酶B.

关键词：组织蛋白酶B、抗体制备、免疫印迹

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分类号：S433(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金39870095,30080002,30330070;国家高技术研究发展计划863计划2001AA214031-1-2

在线出版日期：2004-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：132-136