利用体腔显微注射法实现非编码RNA在家蚕头部稳定过表达
[目的]通过体腔显微注射非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)过表达载体,研究注射后ncRNA在家蚕Bombyx mori幼虫不同组织中的表达情况,探索研究家蚕ncRNA功能的便捷方法.[方法]利用显微注射仪(玻璃显微注射针)在家蚕5龄第3天幼虫第7-8腹节褶皱处分别注射家蚕ncRNA Bm-15和Bm-152过表达载体piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-15]和piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-152],注射48 h后提取家蚕幼虫头、胸、尾部、腹部背板、腹部腹板和丝腺总RNA,荧光定量PCR检测Bm-15和Bm-152在家蚕幼虫不同组织中的表达情况.[结果]采用玻璃显微注射针造成的创伤面小,注射后家蚕出现感染和死亡的比例低于10％.注射ncRNA Bim-15过表达载体后,在家蚕幼虫头部和尾部都检测到Bm-15的显著性过表达,头部中Bm-15表达量较注射piggyBac[A3-EGFP]空载体时上升了17倍,在其他4个组织中Bm-15表达量与正常饲养组家蚕对照相比变化不显著.注射Bm-152过表达载体后,同样在家蚕幼虫头部和尾部都检测到Bm-152的显著过表达,其中头部中的表达量较注射piggyBac[A3-EGFP]空载体时上升了6.6倍.腹部背板和丝腺中Bm-152过表达效果也较明显,分别是注射piggyBac[A3-EGFP]空载体时表达量的3.4和4.5倍.[结论]体腔显微注射ncRNA过表达载体可以实现ncRNA在家蚕头部中稳定过表达.本研究为后续研究神经相关ncRNA的功能提供了较好的思路和方法.
家蚕、非编码RNA、组织、过表达载体、体腔显微注射
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Q522(核酸)
国家自然科学基金项目31100938;中国科协青年人才托举工程项目YESS20150026;河南省科技厅基础与前沿项目162300410133
2019-09-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
779-786
