家蝇Mdsirt1基因在细菌、高温和重金属胁迫下的表达分析

摘要：

[目的]探究家蝇Musca domestica sirt1基因(Mdsirt1)在各种胁迫条件下的表达模式.[方法]以家蝇2龄幼虫cDNA为模板,PCR扩增Mdsirt1基因序列并进行生物信息学分析;实时定量PCR(qRT-PCR)检测Mdsirt1在家蝇不同发育阶段(卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和成虫)的表达变化,2龄幼虫不同组织(表皮、肠道、脂肪体和血细胞)中的表达分布,以及胁迫条件(细菌刺激、热激及CdCl2刺激)下的转录水平变化;通过RNAi干扰Mdsirt1基因表达,观察敲低Mdsin1表达后家蝇幼虫抗病能力变化,并检测机体氧化应激水平.[结果]家蝇Mdsirt1基因编码蛋白含有SIR2结构域,与厩螫蝇Stomoxys calcitrans SIR2氨基酸序列一致性为66％.qRT-PCR结果显示,Mdsirt1基因主要在家蝇蛹期表达,在家蝇2龄幼虫脂肪体中表达量较高.家蝇幼虫Mdsirt1分别在大肠杆菌Escherichia coli刺激3h,金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus刺激6h,42℃热激30min以及30 mmol/L CdCl2刺激48 h时表达量达到最高峰.敲低Mdsirt1表达的家蝇幼虫受到细菌感染(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌1∶1混合感染)后存活率较对照组显著降低1.47倍,且敲低Mdsirt1后机体处于氧化应激状态,活性氧自由基水平和丙二醛含量较对照组分别升高1.58和1.59倍.[结论]Mdsirt1参与家蝇幼虫的抗菌免疫应答和抗逆反应.

关键词：家蝇、Sirtuins蛋白、免疫、热激、重金属胁迫

所属期刊栏目：60

分类号：Q966(昆虫学)

资助基金：国家自然科学基金项目31572327;河北省自然科学基金项目C2015201013;河北省重点实验室运行补助费14967611D

在线出版日期：2018-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1394-1402