家蚕半乳糖凝集素BmGalectin-4的表达、纯化及性质分析
[目的]鉴定一种新的家蚕Bombyx mori半乳糖凝集素(galectin)基因,分析其序列和结构特征,测定其在微生物感染后的表达变化,分析其重组表达蛋白与微生物及微生物表面多糖分子的结合特性.[方法]利用TBlastN从家蚕基因组数据库中搜索得到一种新的半乳糖凝集素基因,命名为BmGalectin-4.利用生物信息学分析其序列和结构特征,用半定量RT-PCR检测家蚕分别感染病原菌绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和白色念珠菌Candidiasis albicans后BmGalectin-4在不同组织中的表达变化,采用原核表达技术对该基因进行重组表达,并利用亲和层析得到纯化的蛋白.通过ELISA检测BmGalectin-4与细菌和真菌的结合;通过Western blot检测它与多糖的结合.[结果]序列分析显示,BmGalectin-4是一种串联重复型半乳糖凝集素,含有2个糖识别结构域,其结构非常保守.RT-PCR检测表明,BmGalectin-4在家蚕脂肪体、血细胞和中肠中都有表达,且感染细菌和真菌后其表达有显著变化.纯化的重组BmGalectin-4与革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌有较强的结合,与微生物表面多糖的结合试验表明其识别有较高的特异性.[结论]BmGalectin-4是一个典型的串联重复型半乳糖凝集素,可能参与家蚕对病原微生物的免疫防御反应.本研究为进一步研究昆虫中半乳糖凝集素的功能奠定了基础.
家蚕、微生物感染、半乳糖凝集素、重组蛋白、多糖、糖结合
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Q966(昆虫学)
国家重点基础研究发展规划“973”计划项目2012CB114604
2014-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
806-814
