对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1Aa基因的分离克隆及表达

摘要：

Bt菌Ly30株是我国自行分离的对多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌,经CAPS(cleaved amplified polymorphic se-quences)系统鉴定,它含有cry1Aa基因.以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法,设计一对特异引物,分别引入NcoⅠ和BamHⅠ/Nco Ⅰ酶切位点.以Ly30质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因,与表达载体pKK233-2相应酶切产物连接,转化大肠杆菌,获得含有cry1Aa基因重组质粒pKKLy1Aa.完成了该基因的亚克隆和序列测定,结果表明,该基因的编码区为3 531 bp,编码蛋白分子量为133.2 kD,含1176个氨基酸,等电点pI为4.99.该基因序列已在GenBank中登记注册,登录号为AF384211,并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa12.对重组菌KKLy1Aa进行诱导表达研究.在0.6mmol/L IPTG、37℃、8 h培养条件下,该基因获得高效表达,SDS-PAGE电泳检测到明显的133.2 kD蛋白带.室内生测结果表明,Cry1Aa蛋白对不同的小菜蛾品系均有较高的杀虫活性,其LC50值分别为0.203μg/mL和0.554μg/mL.

关键词：苏云金芽孢杆菌、Ly30菌株、cry1Aa基因、克隆、表达、杀虫活性

所属期刊栏目：46

分类号：Q965.8(昆虫学)

资助基金：国家转基因植物研究和产业化专项基金J99-A-033

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：150-155