胆汁中外泌体及外泌体RNA提取方法比较

摘要：

目的 比较超速离心法和聚合沉淀法分离胆汁外泌体及外泌体RNA的差异.方法 收集2017年6月至2018年12月在南京医科大学第二附属医院消化内科行内窥镜逆行胆囊-胰腺造影术(ERCP)患者术中胆汁,分别采用超速离心法和聚合沉淀法对胆汁进行分离.采用透射电镜法观察提取外泌体的形态;采用粒径分析所得粒子的直径;采用流式细胞术检测表面标记物CD63和CD81的表达差异;Trizol法提取RNA,分析RNA水平及A260/A280;采用实时荧光定量(RT-PCR)检测4种miRNA表达,分析两种方法所得平均CT值的差异.结果 超速离心法和聚合沉淀法所得外泌体形态和粒径分布无明显差异;流式细胞术分析显示,超速离心法所得外泌体CD63和CD81阳性率较高.RNA分析显示,聚合沉淀法提取RNA水平较高,检测的miR-671-5p、miR-126-3p、miR-210-3p、miR-483-5p平均CT值较小.结论 超速离心法和聚合沉淀法均可提取出一定数量的外泌体,其中超速离心法得到的RNA较纯,而聚合沉淀法得到的RNA水平较高,可用于稀缺标本的检测.因此,进一步寻找高敏感、高特异、经济便捷的方法仍然十分必要.

关键词：胆汁、外泌体、核糖核酸、超速离心、聚合沉淀

所属期刊栏目：16

分类号：Q522(核酸)

资助基金：南京市卫生科技发展专项资金项目YKK18110,YKK18189

在线出版日期：2020-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3405-3409