10.3969/j.issn.1672-9455.2017.02.011
HPLC-MS/MS检测血清25-羟维生素D方法的建立和基本性能评价
目的:建立一种检测血清25‐羟维生素D2[25(O H )D2]和25‐羟维生素D3[25(O H )D3]的高效液相色谱串联质谱(HPLC‐MS/MS)方法,以用于常规临床评价维生素D水平。方法以稳定同位素标记的25(OH)D2‐d3和25(OH)D3‐d3作内标,血清标本和标准品采用饱和硫酸锌和乙腈沉淀血清蛋白,正己烷提取。采用 HPLC‐MS/MS技术进行分析,固定相为Poro‐shell 120 EC‐C18正向柱,电喷雾离子源(ESI),多反应监测模式(M RM ),干燥气温为275℃,干燥气流为10 L/min ,喷雾器压力为50 psi ,毛细管电压为5000 V。以甲醇(80%)和超纯水(20%)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL/min ,柱温为50℃,质谱采用高温ESI ,以选择反应监测模式进行定量分析。结果25(OH)D2和25(OH)D3内标峰面积比与对应的水平线性相关系数均大于0.995,检出限(LOD)均为1.0 ng/mL ,定量限(LOQ)分别为2.0 ng/mL和1.5 ng/mL ,25(OH)D2批内和总变异系数分别为3.01%~5.23%和3.45%~8.72%,25(O H )D3批内和总变异系数分别为1.78%~3.43%和2.19%~4.16%,准确度分别为105.4%和98.0%~104.9%,加样回收率分别为99.67%~103.92%和98.72%~104.04%。结论本研究建立的 HPLC‐MS/MS方法检测血清中25(OH)D2和25(OH)D3灵敏度高,准确性好,可用于常规临床评价维生素D含量。
25-羟维生素D、液相色谱法、串联质谱法
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R58;R1
国家高技术研究发展计划2014AA022304。
2017-03-17(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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