三种方法提取血清miRNA效果的比较

摘要：

目的：比较Trizol法、蛋白酶K消化＋ Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA的效果。方法分别选取2例健康人、2例肺炎患者和2例肺癌患者血清，以Let‐7a‐5p作为目标mRNA ，线虫Cel‐miR‐39‐3p作为内参，分别采用Trizol法、蛋白酶K消化＋ Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA ，以Let‐7a‐5p及Cel‐miR‐39‐3p特异性引物进行反转录PCR ，以反转录PCR产物为模板运用SYBGreen Ⅰ法进行荧光定量PCR检测。结果 T rizol法与蛋白酶K消化＋ Trizol法均能有效提取到血清miRNA ，而沉淀裂解法由于没有对血浆中的RNA进行富集故提取效果不佳。T rizol法提取较蛋白酶K消化＋ T rizol法相比，可以减少蛋白酶K的消化时间且提取效果更好，并且血清与Trizol试剂的体积比为200∶600时效果相对较好。三种方法检测Cel‐miR‐39‐3p的Ct值基本一致。Tr‐izol法和蛋白酶K消化＋ Trizol法在提取过程中加入的内参丢失较少。结论 Trizol法作为总RNA提取的手段适用于血清miRNA提取，通过调整血清与Trizol试剂的用量可使提取到的血清miRNA能够满足试验需要。

关键词：miRNA、Let-7a-5p、Cel-miR-39-3p、提取

分类号：R28;TQ6

资助基金：国家自然基金青年项目81401311；首都临床特色应用研究项目[吴阶平Z141107006614009]。

在线出版日期：2015-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2976-2978