慢病毒感染稳定敲减eIF4E基因的鼻咽癌CNE2细胞系的建立

摘要：

目的：构建稳定干扰真核起始因子4E（eIF4E）基因的鼻咽癌 CNE2细胞系。方法设计针对 eIF4E基因 mRNA 序列的 RNA 干扰序列，以慢病毒载体 pGC‐LV 为基础构建感染体系。慢病毒感染 CNE2细胞后，经嘌呤霉素压力筛选稳定敲减 eIF4E 基因的 CNE2细胞株。采用定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测 eIF4E mRNA和蛋白的表达水平；采用细胞增殖和迁徙实验验证 eIF4E 敲减对 CNE2细胞的影响。结果成功构建并筛选获得带有 eIF4E 特异性短发夹 RNA 的慢病毒颗粒；将慢病毒颗粒转入 CNE2细胞，经抗菌药物压力筛选获得稳定敲减eIF4E 基因的 CNE2细胞（CNE2siEp）及阴性对照细胞（CNE2siNC）。与 CNE2siNC 细胞相比，CNE2siEp 细胞eIF4E mRNA 表达水平下调76．0％，蛋白表达水平下调50．0％，细胞增殖活性下调85．0％，运动活性下调59．0％。结论成功构建稳定敲减 eIF4E 的 CNE2细胞系，其 eIF4E 基因表达水平与功能明显受抑。

关键词：真核起始因子4E、敲减、慢病毒感染、RNA干扰

分类号：R73;S

资助基金：广东省卫生厅医学科研基金项目B2013291。

在线出版日期：2015-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：888-890,894