新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体的构建

摘要：

目的：构建4个新靶点的人CyclinE干扰RNA真核表达载体，转染人脑胶质细胞瘤U251细胞，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测mRNA表达，获得干扰效果最好的真核表达载体，为CyclinE成为人脑肿瘤标志物提供有价值的资料。方法（1）构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后，用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否；（2）用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤 U251细胞株；（3）通过 RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量，选出干扰效果最好的1个。结果（1）成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。（2）CyclinEmRNA 表达明显受到抑制，并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。结论成功构建并筛选出效果最好的新靶点Cy-clinE干扰RNA真核表达载体，使U251细胞的CyclinE mRNA表达明显降低。

关键词：干扰RNA、新靶点、细胞周期蛋白E、胶质瘤

分类号：R73;R5

资助基金：内蒙古自然科学基金资助项目2012MSll47。

在线出版日期：2014-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2958-2959,2962