实时荧光定量聚合酶链反应技术检测解脲脲原体生物群的研究

摘要：

目的 建立解脲脲原体生物群Taqman荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 根据解脲脲原体生物群MBA基因差异,分别设计并合成引物和探针.优化引物和探针浓度及试验条件,并进行试验的灵敏度、特异性和重复性评价.结果 生物1群最适缓冲体系:25 μL反应体系中包含2.5 U Taq酶,Mg2+ 2.5 mmol/L,上、下游引物0.1 pmol/L,TaqMan探针0.2 pmol/L,模板DNA 2 μL.生物2群最适缓冲体系:25 μL反应体系中包含2.5 U Taq酶,Mg2+2.5 mmol/L,上、下游引物0.2 pmol/L,TaqMan探针0.3 pmol/L,模板DNA 2 μL.PCR反应条件:95 ℃ 2 min;95 ℃ 10 s;55℃(检测荧光信号)20 s,循环40次.该方法线性范围在1.0×102～8 copy/mL之间,检测限达到100～200 copy/mL,特异性达到100%,CV值为2.5%.结论 本研究建立的TaqMan荧光PCR检测解脲脲原体生物群线性范围宽、灵敏度高、特异性及重复性好,能够快速进行解脲脲原体生物群检测.

关键词：解脲脲原体、实时荧光定量聚合酶链反应、生物群、检测

所属期刊栏目：8

分类号：U47;TV7

资助基金：江苏省常州市卫生局资助课题WZ200818

在线出版日期：2011-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1800-1802