实时荧光定量PCR筛选有效RNA干扰方法的建立

摘要：

目的 建立一种利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-QPCR)技术检测RNA干扰(RNAi)效果的方法,为筛选有效的RNAi提供一种科学、可靠的实验方法.方法 选用质粒载体pavu6.1-27构建的3个携带NCOA-3基因干扰序列和一个阴性对照序列的重组质粒,转染ECA109细胞,培养48 h,在荧光显微镜下观察荧光细胞的数目,计算转染效率,然后收集细胞提取总RNA,RT-QPCR检测各组转染细胞NCOA-3基因mRNA表达量,从而计算各组的干扰效率.结果 相对于A组未转染细胞,各组mRNA表达量分别为B组101.3%,C组85.5%,D组69.8%,E组72.2%,C、D、E组于A组和B组差异均有统计学意义(P＜0.05),而A组和B组相比差异无统计学意义(P＞0.05),计算得到3个干扰载体的干扰效率分别为39.0%、82.1%、75.6%.结论 RT-QPCR能进行RNAi效果的筛选,其自动化程度和检测灵敏度高;本研究建立的利用RT-QPCR筛选有效RNAi片段的方法可以为肿瘤研究、药物筛选、功能基因组研究等各个领域提供可靠的实验基础.

关键词：实时荧光定量聚合酶链反应、RNA干扰、NCOA-3基因、转染效率、干扰效率

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分类号：R446(诊断学)

在线出版日期：2010-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：903-905