人IL-12基因与糖基化磷脂酰肌醇信号肽序列融合基因真核双表达质粒的构建及表达

摘要：

目的 将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与人白细胞介素12(hIL-12)基因拼接成融合基因,构建该融合基因的真核双表达质粒,并检测融合基因在肾癌细胞的表达.方法 将人胎盘碱性磷酸酶-1(hPLAP-1)C末端信号肽序列与hIL-12的P40亚基基因进行拼接,亚克隆至真核双表达质粒pBudCE4.1,再将IL-12的P35亚基基因亚克隆至pBudCE4.1的另一个多克隆位点.酶切及测序鉴定质粒.将质粒转染肾癌细胞株RC-2,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测其表达.结果 分别成功扩增出IL-12 P40基因987 bp和P35基因762 bp,合成hPLAP-1 C末端信号肽序列117 bp,并将GPI信号肽序列与P40基因成功拼接,成功构建了真核表达载体pBudCE4.1/IL-12A/IL-12B-GPI(命名为pBIG),经酶切及测序鉴定正确.激光共聚焦显微镜观察带锚定蛋白的IL-12在肾癌细胞膜上高表达,并能被磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C洗脱.结论 真核双表达载体pBIG的构建及表达,为进一步制备肾癌疫苗奠定了基础.

关键词：白细胞介素12、糖基磷脂酰肌醇类、蛋白分选信号、基因表达、基因融合、真核细胞、质粒

所属期刊栏目：6

分类号：R392.11;R73-3

在线出版日期：2009-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1313-1314,1316