旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究

摘要：

根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针.以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法.该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应.最小检出量为1.32×102拷贝(10-5条旋毛虫),建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%.平行检测组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异.人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%.对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性.

关键词：旋毛虫、实时荧光PCR、检测

所属期刊栏目：19

分类号：R383.1+5;Q503(医学寄生虫学)

资助基金："十一五"黑龙江省科技攻关计划项GZ078101;国家质量监督检验检疫总局科技支撑计划项目2008IK022;国家科技支撑计划重大项目2006BAD06A09;国家自然科技资源基础平台项目2005DKA21104

在线出版日期：2009-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：9-13