骨桥蛋白通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的机制探讨

摘要：

背景 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)可参与低氧引起的血管重塑,使肺动脉压力升高.但OPN调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)自噬在低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)形成中的作用机制尚不明确.目的 探讨低氧条件下OPN对PASMCs增殖及通过PI3K/AKT/mTOR通路对PASMCs自噬的调控作用.方法 原代分离PASMCs,采用免疫细胞化学法进行平滑肌细胞鉴定.将细胞分为常氧对照组(Normoxia)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧+OPN干扰空病毒组(H+OPN EV)、低氧+OPN干扰慢病毒组(H+OPN shRNA)、低氧+PI3K抑制剂LY294002组(H+LY).各组分别用EdU阳性标记率法检测细胞增殖能力;Western blot法检测各组PASMCs中的OPN、PI3K、AKT、mTOR及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达;透射电镜、免疫荧光法观察各组PASMCs自噬情况.结果 与Normoxia组相比,Hypoxia组OPN、PI3K、AKT、mTOR、Beclin1、LC3B蛋白表达量升高(P＜0.05),细胞增殖能力增强(P＜0.05),自噬小体数量增多,LC3B、Beclin1红色荧光强度增强(P＜0.05).与Hypoxia组相比,H+OPN EV组各项指标无统计学差异(P＞0.05),而 H+OPN shRNA组和 H+LY组 OPN、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达量降低(P＜0.05),Beclin1、LC3B蛋白表达量升高(P＜0.05),细胞增殖能力减弱(P＜0.05),自噬小体数量增多,LC3B、Beclin1红色荧光强度增强(P＜0.05).结论 在低氧条件下,OPN可促进PASMCs增殖并通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制PASMCs自噬.

关键词：低氧、骨桥蛋白、细胞自噬、细胞增殖、PI3K/AKT/mTOR信号通路

所属期刊栏目：44

分类号：R544.1(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金;青海省昆仑英才·高端创新创业人才项目

在线出版日期：2023-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：533-540,548