脱脂极低密度脂蛋白的制备及其对血管内皮细胞功能的影响

摘要：

背景 极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)是动脉粥样硬化的危险因素,由三酰甘油、胆固醇和多种载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)构成.由于载脂蛋白分离难度较大,鲜有研究关注VLDL中所含多种载脂蛋白共同作用对动脉粥样硬化的影响.目的 使用改良沉淀浓缩法纯化脱脂极低密度脂蛋白(apolipoprotein very low density lipoprotein,ApoVLDL)并评估ApoVLDL对EA.hy926内皮细胞的损伤作用和黏附功能的影响.方法 使用沉淀法去除血清中的低密度脂蛋白,然后依次经超滤浓缩离心管浓缩和密度梯度离心分离得到VLDL,最后脱脂得到ApoVLDL,分别使用不同浓度(0μg/mL,50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)的ApoVLDL对EA.hy926内皮细胞进行孵育,以评估ApoVLDL对EA.hy926内皮细胞活力和黏附功能的影响.结果 ApoVLDL可以通过改良沉淀浓缩法得到,ApoVLDL粒径为(141.3±0.64)nm,多分散性指数(polydispersity index,PDI)为 0.27±0.0076,Zeta电势大小为(-18.73±0.58)mV,颗粒大小均匀,分散系较稳定.使用ApoVLDL孵育EA.hy926内皮细胞 24h后,细胞活力降低明显,呈浓度依赖趋势(P＜0.0001).当ApoVLDL浓度为100μg/mL时,相比对照组,EA.hy926内皮细胞 24h划痕闭合率明显变小(11.10％±0.693％vs50.57％±2.66％,P＜0.001),提示EA.hy926内皮细胞迁移能力受到明显抑制;同时,EA.hy926内皮细胞黏附的白细胞数明显增加(22.13±1.04vs7.25±1.58,P＜0.01),且EA.hy926内皮细胞VCAM-1 mRNA的表达显著增加(P＜0.01).结论 使用改良沉淀浓缩法可以有效制备ApoVLDL.使用ApoVLDL诱导的EA.hy926内皮细胞功能障碍,可为Apo C-Ⅲ诱导内皮功能障碍研究提供一种特异性体外细胞损伤模型.

关键词：极低密度脂蛋白、内皮损伤、体外细胞模型、血脂、改良沉淀浓缩法

所属期刊栏目：44

分类号：R543.5(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金81973502

在线出版日期：2023-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：150-155