肿瘤坏死因子α刺激下人牙髓干细胞与CD3+T细胞共培养后生物学功能的变化

摘要：

背景 牙髓干细胞(dental?pulp?stem?cells,DPSCs)作为目前组织工程中优质的种子细胞,具有强大的免疫调节能力.在炎症微环境下,牙髓干细胞的多种生物学功能会有不同程度的改变.目的 研究肿瘤坏死因子α(tumour?necrosis?factor-α,TNF-α)刺激下人牙髓干细胞与CD3+?T细胞共培养后生物学功能变化.方法 劈冠法分离获取DPSCs并进行分离传代.利用5?ng/mL、10?ng/mL、15?ng/mL不同浓度的外源性TNF-α诱导P3代细胞产生炎症反应,CCK8法检测各组细胞增殖情况;对正常组织来源的牙髓干细胞(DPSCs?obtained?from?a?healthy?microenvironment,HDPSCs)及炎症微环境来源(10?ng/mL的TNF-α预刺激24?h)的牙髓干细胞(DPSCs?obtained?from?a?inflammatory?microenvironment,IDPSCs)进行成骨诱导分化培养并进行茜素红染色,同时对HDPSCs进行成脂诱导分化培养并进行油红O染色.实时荧光定量PCR(quantitative?real-time PCR,qPCR)检测HDPSCs和IDPSCs的TNF-α、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达水平;实时定量qPCR检测常规培养(undifferentiation,undiff)和成骨诱导(differentiation,diff)前后成骨基因Runt相关因子2(runt-related?gene?2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline?phosphatase,ALP)的mRNA表达水平.免疫磁珠法从人外周血中分离获取CD3+?T细胞,将DPSCs和CD3+?T细胞按照1:0、1:10、1:20、1:50、1:100的比例在正常环境及TNF-α刺激环境中直接共培养,用qPCR分别检测TNF-α、IL-1β、β-catenin及淋巴样增强因子1(lymphoid?enhancer?factor?1,LEF-1)的mRNA表达水平.结果 CCK8法示10?ng/mL?TNF-α刺激组的DPSCs吸光度值显著高于其他三组(P<0.05).常规培养条件下,TNF-α刺激组Runx2、ALP的mRNA表达水平与正常组无统计学差异;成骨诱导条件下成骨细胞相关的mRNA表达正常组低于TNF-α刺激组(P<0.05).IDPSCs组IL-1β、TNF-α的mRNA表达高于HDPSCs组(P<0.05).在DPSCs与CD3+?T细胞共培养实验中,正常组DPSCs与CD3+?T培养比例为1:100时IL-1β、LEF-1的mRNA表达水平最低,β-catenin的mRNA表达水平最高,1:20时TNF-α的mRNA表达水平最低;而在TNF-α刺激组中,比例为1:20时IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平最低,β-catenin及LEF-1的mRNA表达水平最高.结论 在TNF-α刺激下,DPSCs的炎性因子表达增加,促进向成骨细胞分化;在与CD3+?T细胞共培养的免疫环境中,炎性因子受到抑制,Wnt/β-catenin经典通路被激活.

关键词：牙髓干细胞、CD3+T细胞、肿瘤坏死因子、成骨细胞、炎性因子、Wnt通路

所属期刊栏目：42

分类号：R781(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金31670998

在线出版日期：2021-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：418-424