酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库中与肺癌转移相关蛋白作用的蛋白

摘要：

目的 采用酵母双杂交系统从人肝cDNA文库筛选肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)的相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1功能提供线索.方法 构建酵母双杂交诱饵质粒(pGBKT7-LCMR1),转化至AH109感受态酵母菌,在融合蛋白表达、自激活活性及宿主毒性检测后,应用酵母双杂交筛选与LCMR1相互作用的蛋白.除去阳性克隆中多余质粒后,用PCR和酶切方法减少重复克隆,并经共转化重复检测相互作用后得到真阳性克隆.对真阳性克隆进行测序及生物信息学分析.结果 成功构建pGBKT7-LCMR1诱饵质粒,融合蛋白成功表达且无自激活和毒性作用.初步筛选获得72个阳性克隆,去除多余质粒、经共转化重复验证后,得到阳性克隆14个.经基因和蛋白质测序得到编码序列7个:核糖体蛋白L29、核糖体蛋白S15a、铁调素抗菌肽、补体C3、线粒体ND4L、线粒体ND1、细胞色素P450,其余7个为非编码序列.结论 利用酵母双杂交技术在人肝cDNA文库中成功筛选出与LCMR1相互作用的蛋白7个,为进一步研究LCMR1功能提供了新线索.

关键词：肺癌转移相关蛋白、生物信息学、酵母双杂交

所属期刊栏目：38

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2017-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：540-544