不同方法制备兔自体富血小板血浆凝胶支架促进脂肪干细胞增殖比较

摘要：

　　目的探讨不同浓度及离心方法制备自体富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)凝胶支架对脂肪干细胞(adipose derived stem cells，ADSCs)增殖及生长因子释放的影响。方法取新西兰大白兔动脉血分别采用二次及三次离心法制备自体富血小板血浆支架，检测其中的血小板浓度，同时通过添加DMEM培养基将PRP中血小板绝对浓度调整为相同的1000×109/L，之后继续向其中加入培养基将PRP按体积分数调整为30%、40%、50%、60%的不同浓度，并设置仅含培养基的空白对照组。之后向各组PRP中植入经荧光染色的脂肪干细胞(ADSCs)。7d内每日观察计数细胞数目绘制细胞生长曲线，在第2、3、4、6天用MTT比色法分析各组脂肪干细胞的存活和增殖能力，通过ELISA定量检测培养7 d后PRP脂肪干细胞复合体中生长因子TGF-β1及细胞的Ⅱ胶原含量。结果二次离心法及三次离心法所制备的PRP中血小板浓度分别为(1320.5±227.3)×109/L及(1724.5±316.3)×109/L，为全血中血小板浓度的5.4及7.1倍，三次离心法所制备的PRP中血小板浓度明显高于二次离心法(P＜0.05)。采用两种离心方法所制作的PRP细胞复合体中的脂肪干细胞数目均在其PRP其中血小板浓度为500×109/L时达到最高值，分别为(1.02±0.13)×104及(1.00±0.14)×104(P＞0.05)。各组不同浓度的PRP浓度的PRP细胞复合体中当其中血小板浓度达500×109/L时其中脂肪干细胞数目、活性均为最高，且其中的TGF-β1及细胞的Ⅱ胶原含量也高于其他各组(P＞0.05)。结论三次离心法制备PRP，血小板收集率较二次离心法高，但在促进脂肪干细胞增殖上无明显差异。PRP中血小板浓度达500×109/L左右时，其中的脂肪干细胞增殖及活性达到最高，可能是制备PRP脂肪干细胞复合体的最适浓度。

关键词：椎间盘退行性变、富血小板血浆、脂肪干细胞、组织工程、血小板浓度

分类号：R318.08(医用一般科学)

在线出版日期：2013-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：635-639