基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备

摘要：

利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体.将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC.通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中,Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体.

关键词：Spyligase技术、流感血凝素H5HA10、原核表达、融合标签、多聚体

所属期刊栏目：31

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目"动物重大疫病新概念防控产品研发"2017YFD0501100;河南省高等学校重点科研项目17A230013

在线出版日期：2019-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1-9