大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

摘要：

以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板,根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物,通过PCR扩增到1条长约1.15 kb的特异片断,把该片断连接到pUCm-T载体上进行测序.序列分析结果表明,该基因编码区全长1149 bp,共编码382个氨基酸,与报道的mtlD基因修正序列完全一致.将该基因插入到原核表达载体pET28a(+),IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,发现在约45 kD处明显比对照多出1条带,凝胶扫描后经Bandscan 5.0软件分析表明,该特异条带的蛋白含量占菌体可溶性总蛋白的72.9%.Western blot检测其为带组氨酸标签的融合蛋白,而质谱分析证实其为甘露醇-1-磷酸脱氢酶.转化子的耐盐能力比对照提高了约20%.该基因提交到GeneBank数据库,返回的接受号为DQ660889.

关键词：大肠杆菌、W3350菌株、甘露醇-1-磷酸脱氢酶、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：19

分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省高校自然科学基金Z02036

在线出版日期：2007-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：5-8,15