在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段

摘要：

噬热栖热菌(Thermus thermophilus)是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子.利用此原理,在T.thermophilus中开发了一种新的基因无痕敲除手段,基本方案是:将目的基因的上下游DNA序列克隆到pUC18载体后转化T.thermophilus,将转化混合物涂布在无筛选的平板上;混合池法提取96个单菌落的基因组DNA,PCR鉴定出含有突变型等位基因的菌株;将该杂合型突变菌株在无筛选条件下培养后(使杂合子纯合化)涂板,通过PCR法从单菌落中鉴定出纯合的基因无痕敲除突变株.利用该系统成功敲除了T.thermophilus的TTC0340_0341基因,获得突变体的概率达到了10-2.该方法最显著优点是无需任何筛选标记、能在野生型遗传背景下使用.

关键词：噬热栖热菌、多倍体、基因无痕敲除手段

所属期刊栏目：41

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目31700059;陕西省自然科学基础研究计划项目2018JQ3037;陕西省高校科协青年人才托举计划项目20180210

在线出版日期：2019-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：577-583