建兰花叶病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)是引起兰科植物病毒病的最重要病原体.研究根据NCBI上已登录的CyMV外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因保守区设计两对特异性引物,用RT-PCR法从感病蝴蝶兰中克隆到2条CyMV CP基因序列,编码区ORF长672 bp,编码223个氨基酸.序列分析表明这两个分离物之间有13个核苷酸差异,与已报道的其他地区CyMV分离物CP基因核苷酸相似性分别为97%~99%和97%~98%,氨基酸相似性分别为95%~99%和96%~100%.运用实时荧光定量RT-qPCR法对该病毒检测方法进行了一系列条件优化,建立起一套基于SYBR Green I的CyMV实时荧光定量PCR检测体系.该检测方法比普通RT-PCR法灵敏度高100倍,标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度的对数呈现良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998.重复性试验表明组内及组间变异系数均在2.58%以内,表明该方法重复性较好,可为兰花CyMV的早期预警及病毒在植物体内侵染途径研究提供技术支持.

关键词：建兰花叶病毒、实时荧光定量PCR、外壳蛋白基因、病毒检测

所属期刊栏目：39

分类号：Q949.71+8.43(植物学)

资助基金：河南省科技攻关项目162102110073;郑州市科技攻关项目141PPTGG420;河南省产学研合作计划项目152107000071资助 Project supported by Henan Science and Technology Project162102110073;Zhengzhou Science and Technology Project141PPTGG420;Henan Industry University Research Cooperation Project152107000071

在线出版日期：2017-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：572-580