基于毛细管电泳技术的牡丹SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

摘要：

以牡丹叶片DNA为模板,对SRAP -PCR反应程序进行研究,确定适合的反应程序,即94℃预变性5 min; 94℃变性1 min,33℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环；随后94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环；最后72℃延伸10 min.基于毛细管电泳技术,采用正交设计L18( 37)对牡丹SRAP - PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)3个水平进行了优化,构建了牡丹SRAP最佳反应体系:模板DNA 50 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Mg2浓度2.5 mmol/L,引物浓度0.4 μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,总体积为25 μL.各因素对扩增结果影响程度均不同:dNTPs＞引物＞DNA模板＞Mg2+＞Taq酶.运用该体系从756个SRAP引物组合中筛选出多态性好、条带清晰的26个引物组合,并证明了该体系稳定可靠.该体系的建立以及引物组合的确定为今后利用SRAP分子技术进行牡丹的相关研究奠定了科学基础.

关键词：牡丹、SRAP、毛细管电泳、体系优化、引物筛选

所属期刊栏目：34

分类号：S685.11(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：国家林业局林业公益性行业科研专项200904050

在线出版日期：2012-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：158-164