兼性离子修饰亲水磁珠固定化谷胱甘肽-S-转硫酶P1及其表征

摘要：

谷胱甘肽-S-转硫酶P1(Human glutathione-S-transferaseπ1,hGSTP1)为肿瘤耐药增敏药靶.为探索磁珠固定化hGSTP1的合适方案用于磁分离指数富集从混合物中筛选高亲和力配体,重组表达6×His-hGSTP1,分别用Ni2+-NTA琼脂糖和GSH-Sepharose 4B层析柱纯化,采用亲水兼性离子修饰的羧基磁珠和Ni2+-NTA磁珠固定化6×His-hGSTP1,表征其固定化容量、保留活性、稳定性以及对抑制剂响应性.羧基磁珠不能有效固定GSH-Sepharose 4B层析柱纯化hGSTP1,可有效固定Ni2+-NTA层析柱纯化hGSTP1,但最大保留酶活仅约30％.Ni2+-NTA磁珠可有效固定两种方法纯化蛋白,其饱和固载容量约为羧基磁珠的1.7倍且最大保留酶活均可达80％.Ni2+-NTA磁珠固定化hGSTP1在pH 6.5 PBS中0℃振摇8 h活性未见明显改变,相同条件游离酶活性下降约20％;在筛选后甲醇80℃处理20 min不脱落.Ni2+-NTA磁珠固定化hGSTP1和游离酶对抑制剂依他尼酸(Ethacrynic acid,EA)的IC50无显著性差异(P>0.05).因此,Ni2+-NTA磁珠固定化hGSTP1可适用于指数富集筛选混合物库中抑制剂.

关键词：谷胱甘肽-S-转硫酶、固定化、磁珠、混合物筛选、医药原料

所属期刊栏目：37

分类号：O629.8(有机化学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2020-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：772-778