嗜热毁丝菌外切葡聚糖苷酶CBH1环状结构对酶活性及热稳定性的影响

摘要：

糖苷水解酶第七家族(GH7)的外切葡聚糖苷酶(exo-1,4-β-D-glucanase),又称为纤维素生物降解酶(CBHs),在其催化中心活性通道的顶端有1个环状结构,嗜热毁丝菌(Myceliophthora thermophila)第七家族外切葡聚糖苷酶CBH1的环状结构(LS,Loop Structure)由9个氨基酸组成,即G245-Y253,但其对酶特性影响机制尚不清楚.本文构建环状结构缺失突变体CBH1-DM[△(G245-Y253)]以研究该结构对酶特性的影响.野生酶WT与突变酶CBH1-DM通过毕赤酵母表达并纯化,将纯化产物进行酶学性质的测定及分析.研究结果显示野生酶和突变酶的最适反应温度和最适pH值均相同,分别为50℃和5.0.CBH1-DM的比活力为2.42 U/mg,是WT(1.17 U/mg)的2.1倍.野生酶与突变酶在70℃处理1h后,野生酶仅剩余35％的酶活力,而突变酶剩余70％的酶活力,具有较好的热稳定性.研究表明环状结构对酶的活性及热稳定性具有显著影响.

关键词：外切葡聚糖苷酶、酶活力、敲除、环状结构、热稳定性

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分类号：Q556.2(酶)

资助基金：国家科技支撑计划课题2015BAD15B05;国家863计划课题2012AA10180402;国家自然科学基金项目31571949

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：95-101