嗜热革节孢GH1 BGL1进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性的影响

摘要：

糖苷水解酶第一家族(GH1)β-葡萄糖苷酶(BGL1)有葡萄糖耐受性,进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性有很大影响,但具体作用机制尚不清楚.对嗜热革节孢GH1 BGL1进口端的W168、L173、F348、W349、C169、F180、D237、Y179、A260、H307、N335和E437这12个氨基酸残基进行定点突变,将突变酶与野生酶(WT)在毕赤酵母中表达,表达产物纯化后进行酶活性和葡萄糖耐受性测定.与WT相比,所有突变酶活性均有所降低,其中W168H、N335F和W349G几乎丧失活性.突变F180H、D237S、A260N和H307Y的Km低于WT,所有突变的kcat都降低.除L173Q外,其余突变都保持葡萄糖耐受性,在高浓度(400mmol/L)葡萄糖时,Y179F和D237S酶活受到显著抑制.本研究表明,进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性均具有一定影响,催化活性通道的结构特异性可能是葡萄糖耐受机制.

关键词：β-葡萄糖苷酶、定点突变、进口端、葡萄糖耐受性

所属期刊栏目：16

分类号：Q556.2(酶)

资助基金：国家863计划课题2012AA10180402;国家科技支撑计划课题2015BAD15B05;国家自然科学基金项目31571949

在线出版日期：2018-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：36-42